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CCK-8試劑做實驗時有哪些需要注意的事項
  今天我給大家說說用CCK-8試劑做實驗時的注意事項:
 
  1.第一次做實驗時,建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑後的培養時間。
 
  2.接種時注意細胞懸液一定要混勻,以避免細胞沉澱下來,導致每孔中的細胞數量不一致。
 
  3.培養板周圍一圈孔培養液容易揮發,為減少誤差,建議培養板周圍的四邊每孔隻加培養基。
 
  4.建議采用多通道移液器,減少平行孔間的誤差,加CCK-8時,建議斜貼著培養板壁加,不要插到培養基液麵下加,容易產生氣泡,幹擾OD值。
 
  5.若細胞培養時間較長,培養基顏色或pH發生變化,建議更換培養基後再加CCK-8,含有酚紅的培養基不影響測定。
 
  6.CCK-8對細胞的毒性非常低,其他的實驗,例如中性紅法或結晶紫法,也可在CCK-8法檢測完後繼續進行。
 
  7.可以使用大於600nm的波長,例如650nm,作為參考波長進行雙波長測定,CCK-8在參比波長處沒有吸光值,設定參比波長的目的是為了去除由於樣品渾濁所帶來的吸收。
 
  8.如果實驗中待測物質有氧化還原劑,在不含細胞的培養基中加入藥物,然後加入CCK-8試劑在一定時間內檢測,和不加藥物的培養基進行比較(隻加CCK-8試劑),如果OD值明顯偏高,則說明有反應。
 
  9.加CCK-8試劑時速度要快,減少試劑在移液器上的殘留,加入CCK-8試劑後輕輕震培養板,為了避免加樣時由於CCK-8殘留在槍頭上所帶來的誤差,可以在加樣前用培養稀釋CCK-8試劑並混勻後加樣。
 
  10.CCK-8反複凍融會增加背景值,幹擾實驗測定。

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