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你知道elisa試劑盒的操作方法嗎?
  ELISA試劑盒在國內有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。
 
  操作方法
 
  雙抗體夾心法
 
  1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝液將抗體稀釋蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩衝液洗3次,每次3分鍾。(簡稱洗滌,下同)。
 
  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然後洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
 
  3. 加酶標抗體:於各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定後的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
 
  4. 加底物液顯色:於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鍾。
 
  5. 終止反應:於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
  6. 結果判定:可於白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,於450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零後測各孔OD值,若大於規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
 
  間接法
 
  1.用包被緩衝液將已知抗原稀釋1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
 
  2.次日洗滌3次;
 
  3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml於上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
 
  4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)於反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
 
  5.37℃孵育35-60分鍾,洗滌;
 
  6.後一遍用DDW洗滌。
 
  其餘步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

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