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產品名稱:硫氧還蛋白還原酶(TrxR)活性檢測試劑盒

產品型號:BC1150

產品報價:

產品特點:硫氧還蛋白還原酶(TrxR)活性檢測試劑盒
TrxR 是一種 NADPH 依賴的包含 FAD 結構域的二聚體硒酶,屬於吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及 NADPH 共同構成了硫氧還蛋白係統。TrxR 與 GR 活性類似,催化 GSSG 還原生成 GSH,是穀胱甘肽氧化還原循環關鍵酶之一。T

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BC1150硫氧還蛋白還原酶(TrxR)活性檢測試劑盒的詳細資料:

硫氧還蛋白還原酶(TrxR)活性檢測試劑盒


可見分光光度法

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
貨號:BC1150
規格:50T/48S

產品內容:
試劑一:液體 90mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 5 mL 蒸餾水溶解。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 5 mL 蒸餾水溶解。
試劑四:液體×1 支,-20℃避光保存。

產品說明:
TrxR 是一種 NADPH 依賴的包含 FAD 結構域的二聚體硒酶,屬於吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及 NADPH 共同構成了硫氧還蛋白係統。TrxR 與 GR 活性類似,催化 GSSG 還原生成 GSH,是穀胱甘肽氧化還原循環關鍵酶之一。TrxR 催化 NADPH 還原 DTNB 生成 TNB 和 NADP+,TNB 在 412 nm 有特征吸收峰,但還原型穀胱甘肽與 DTNB 同樣能反應生成 TNB,因此本試劑盒利用 2-乙烯吡啶抑製樣品中原有的還原型穀胱甘肽,通過測定 412nm 波長處 TNB 的增加速率,即可計算 TrxR 活性。

自備儀器和用品:
可見分光光度計、低溫離心機、可調節移液器、研缽/勻漿器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

操作步驟:
一、粗酶液提取:
1. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。10000rpm,4℃離心10min,取上清置冰上待檢測。
2. 細菌、細胞:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3s,間隔7s,總時間3min),然後10000rpm,4℃,離心10min,取上清置於冰上待測。
3. 測定前將上清液與試劑四以50:1的體積比混勻(即取100µL上清液加入2µL試劑四混合)37℃水浴30min後冰上。

二、TrxR 測定操作:
1. 分光光度計預熱 30 min 後,調節波長到 412nm,用蒸餾水調零。
2. 試劑一在 25℃(一般物種)或者 37℃(哺乳動物)預熱 30min。
3. 空白管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100µL 試劑二,100µL 試劑三,800µL 試劑一,迅速混勻後於 412 nm 測定 10 s 時吸光度,然後將比色皿放入 37℃水浴 5min 後混勻立即測定 310 s 吸光度,記為 A1 和 A2。△A 空白管=A2-A1。
4. 測定管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100µL 試劑二,100µL 試劑三,700µL 試劑一,100µL 上清液,迅速混勻後於 412 nm 測定 10 s 時吸光度,然後將比色皿放入 37℃水浴 5min 後混勻立即測定 310s吸光度,記為 A3 和 A4。△A 測定管=A4-A3。

三、TrxR 活性計算:
(1)按蛋白濃度計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分鍾生成 1nmol TNB 為一個酶活力單位。

TrxR(U/mg prot)=(△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×109÷(Cpr×V 樣)÷T
=147×(△A 測定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每克樣品每分鍾生成 1nmol TNB 為一個酶活力單位。
TrxR(U/g 鮮重)=(△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×109÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T
=147×(△A 測定管-△A 空白管)÷W
(3)按細胞數量計算
活性單位定義:在25℃或者37℃中,每104個細胞每分鍾生成1nmol TNB為一個酶活力單位。
TrxR(U/104 cell)=(△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×109÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T
= 147×(△A 測定管-△A 空白管)÷細胞數量

ε:TNB 在 412nm 處的摩爾消光係數,1.36 ×104 L/ mol/cm;
d:比色皿光徑,1cm;
V 反總:反應體係總體積,1000µL=0.001L;
Cpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定;
V 樣:加入反應體係中上清液體積,100µL=0.1 mL;
T:反應時間,5 min;
W:樣品鮮重,g;
V 樣總:提取液體積,1mL;
細胞數量:以 104為單位,萬個。

注意事項:
1、哺乳動物組織及血液製品 TrxR 活力測定時,一般須用蒸餾水稀釋 5 倍左右;測定過程操作須迅速。
2、由於提取液中含有一定濃度的蛋白(約 0.1mg/mL),所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

相關文獻:

《Eriodictyol Attenuates Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury through the Activation of JAK2》 作者:Defang Li, Ning Lu, Jichun Han, Xiaoyu Chen, Wenjin Hao, Wenjuan Xu, Xiaona Liu, Lei Ye and Qiusheng Zheng 期刊:Frontiers in Immunology 影響因子:3.845 PMID:29441020
《Down-regulation of miR-320 exerts protective effects on myocardial I-R injury via facilitating Nrf2 expression.》 作者:Zhu XA, Gao LF, Zhang ZG, Xiang DK. 期刊:Eur Rev Med Pharmacol Sci 影響因子:2.721 PMID:30840298
 

硫氧還蛋白還原酶(TrxR)活性檢測試劑盒

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